الصفحة الرئيسية > أخبار > أخبار الشركة

تحليل المشاكل الشائعة في التعبير البروتيني بدائية النواة

تحديث الوقت : 2021-03-04

المصدر:

الآراء : 19

تحليل المشاكل الشائعة في التعبير البروتيني بدائية النواة

يشير تعبير بدائية النواة إلى طريقة بناء ناقل تعبير وإدخال جين هدف غريب في سلالة تعبير من خلال تقنية استنساخ الجينات ، بحيث يمكن التعبير عنها في كائن أو خلية بدائية النواة محددة. يعد نظام التعبير عن البروتين بدائية النواة حاليًا أكثر طرق التعبير عن البروتين شيوعًا والأكثر اقتصادا. يعد نظام تعبير Escherichia coli أحد أكثر أنظمة التعبير عن البروتين بدائية النواة استخدامًا.

Escherichia coli expression system Features

عادة ما يتضمن نظام التعبير الكامل ناقلات التعبير الداعمة وسلالات التعبير. إذا كان تعبيرًا مستحثًا خاصًا ، فإنه يتضمن أيضًا محفزًا ، ويتضمن تعبير الاندماج أيضًا نظام تنقية أو اكتشاف العلامة. عادة ما يعتمد اختيار نظام التعبير على الغرض من التجربة ، مثل مستوى التعبير ونشاط البروتين المستهدف وطريقة تنقية منتج التعبير وما إلى ذلك. يقدم ما يلي المشاكل الشائعة في عملية التعبير بدائية النواة.

 

س: لماذا يظهر البروتين المستهدف دائمًا في شكل أجسام متضمنة؟

ج: في التعبير والتنقية بدائية النواة ، غالبًا ما يخطئ البروتين المستهدف ويتجمع في أجسام متضمنة. بعد الحث ، يمكن أن يصل التعبير عن البروتين المستهدف عادة إلى أكثر من 50٪ من إجمالي بروتين الخلية.

على الرغم من وجود نسبة معينة من البروتين في شكل قابل للذوبان ، فإن ما يصل إلى 95٪ من البروتين موجود في أجسام الشمول. من أجل الحصول على المزيد من البروتين القابل للذوبان ، أثناء التجربة ، يمكن خفض درجة حرارة الحث ، على سبيل المثال ، 16-30 درجة مئوية ، أو يمكن تقليل تركيز IPTG (0.01-0.1 مم) ويمكن إطالة وقت الحث. يمكن أيضًا استخدام وسط خاص لزراعة البكتيريا.



س: لماذا يصعب التعبير عن بروتينات الغشاء؟

ج: يعد معدل النجاح المنخفض نسبيًا لتعبير البروتين عبر الغشاء مشكلة شائعة. قد يكون هناك سببان رئيسيان:

 

1. تتكون بروتينات الغشاء بشكل عام من جزيئات الأحماض الأمينية القوية الكارهة للماء والجزيئات المحبة للماء التي ترتبط بطريقة قفز لتشكيل أبسط بنية كيميائية عبر الغشاء محبة للماء والطارئة للماء ، والتي تشبه بنية ببتيدات الإشارة.

بالنسبة للخلايا بدائية النواة ، لا تكاد العضيات البسيطة تكمل العملية المعقدة للتعرف على إشارة الببتيد واستئصاله ، وتوجيه الشبكة الإندوبلازمية وجهاز جولجي لإعادة التعبئة والإفراز مثل الخلايا حقيقية النواة. تعبر بعض البروتينات الغشاء عدة مرات. بالنسبة للخلايا بدائية النواة يكاد يكون من المستحيل على الخلية إكمال المهمة.


2. بالنسبة للشظايا الكارهة للماء ، تتشكل الأجسام المتضمنة بسهولة في التعبير عن الخلايا بدائية النواة. يمكن أن تمنع الببتيدات الكارهة للماء عملية الترجمة بل وتندمج مع بنية الغشاء بدائية النواة لتشكيل السمية. في غريزة الحماية الذاتية البيولوجية ، ستوقف جميع العضيات عملية تخليق البروتين.

 

إذا كنت مهتمًا بهذا الموضوع ، فيرجى متابعة متابعة المقالة المحدثة من Generalbiosystems حول تحليل المشكلات الشائعة في تعبير البروتين بدائية النواة.