الصفحة الرئيسية > أخبار > اخبار الصناعة

أنواع نظام التعبير E. coli

تحديث الوقت : 2021-02-03

المصدر:

الآراء : 33

أنواع نظام التعبير E. coli
نظام التعبير عن الإشريكية القولونية هو نظام التعبير البروتيني الأكثر استخدامًا. يتم إنتاج حوالي 30٪ من منتجات البروتين المؤتلف في السوق بواسطة نظام الإشريكية القولونية. يحتوي نظام التعبير عن الإشريكية القولونية من شركة Generalbiosystems تقريبًا على ثلاثة أنواع من التعبير.

1. T7 E. القولونية التعبير


يعبر T7 E. coli عن الجين المستهدف عند مستوى أعلى. ولكن إذا كان الجين المستهدف سامًا للإشريكية القولونية ، فإنه سيؤثر على نمو الخلايا. تعبير T7 E. coli عبارة عن نظام تعبير تم إنشاؤه باستخدام محفز T7 وعناصر نظام نسخ الملتهمة T7. إن بوليميراز T7 RNA عبارة عن بوليميريز RNA عالي النشاط.

تبلغ سرعة تخليق الرنا المرسال خمسة أضعاف سرعة بوليميراز الرنا في الإشريكية القولونية. يمكن أيضًا نسخ بعض التسلسلات التي لا يمكن نسخها بواسطة E. coli RNA polymerase. لذلك ، T7 RNA polymerase و T7 في وجود محفز الملتهمة ، لا يمكن لنظام النسخ للإشريكية القولونية نفسها أن ينافس نظام نسخ الملتهمة T7 ، وفي النهاية يتحكم محفز الملتهمة T7 في نسخ البروتين.


2. نظام التعبير Lac and Tac E. coli


نظام التعبير Lac and Tac Escherichia coli هو نظام تعبير تم تصميمه وبنائه بناءً على آلية تنظيم أوبرون Escherichia coli lac. أوبر اللك له هيكل متعدد النتوءات. في حالة عدم وجود محفز ، يرتبط منتج جين عامل التنظيم السلبي lacI بإحكام بالمشغل في اتجاه مجرى المروج ويبدأ نسخ الأنسجة.


في وجود المحرض IPTG ، بعد الارتباط بالقمع ، يتم تقليل القدرة على الارتباط بالأوبرون وفصلها ، وبالتالي تنشيط نسخ أوبرون lac. يسمى نظام التعبير الذي تم إنشاؤه باستخدام مروج tac نظام تعبير Tac.


من أجل تنظيم أنظمة تعبير Lac و Tac بشكل صارم ، يتم تطبيق lacIq متحولة من جين lacI الذي يمكن أن ينتج بروتين مثبط lacI مفرط على نظام التعبير. ومع ذلك ، عندما تم إنشاء ناقل التعبير باستخدام نسخ عالية النسخ ، لا يزال هناك مستوى أعلى من نسخ الخلفية ، وتم إدخال جين lacIq في ناقل التعبير لضمان إنتاج المزيد من بروتين مثبط lacI.


3. نظام التعبير PL و PR E. coli


النظام الذي تم إنشاؤه باستخدام مروجي النسخ المبكر PL و PR لعثة lambda حيث يُطلق على اللب نظام PL و PR E. coli للتعبير. المروجون PL و PR لديهم قدرة قوية على بدء النسخ.

تم اقتراح ودراسة استخدامها لبناء نواقل التعبير في التطور المبكر لنظام التعبير E. coli. يعتمد نظام التعبير هذا على المنتج الجيني لـ cl857 متحولة حساسة لدرجة الحرارة لتنظيم نسخ محفزات PL و PR.

المنتج الجيني موجود في شكل نشط عند درجة حرارة منخفضة (30 درجة مئوية) ، ويفقد عند درجة حرارة أعلى (42 درجة مئوية). حي. ناقل التعبير هذا غير مستقر تمامًا في الإشريكية القولونية العادية ، والذي ينتج عن النسخ المباشر عالي القوة لمحفز PL أو PR بدون منتج الجين cl في البكتيريا.


طريقة واحدة لحل هذه المشكلة هي استخدام lysogenic lambda phage Escherichia coli كبكتيريا مضيفة لناقلات التعبير المعزز PL و PR ؛ الطريقة الثانية هي تجميع الجين cI857ts على ناقل التعبير ، بحيث يمكن أن يكون أكبر نطاق البكتيريا المضيفة للاختيار من بينها.


نظرًا لأن أنظمة التعبير PL و PR لا تحتاج إلى إضافة محرضات كيميائية أثناء الحث ، والتكلفة منخفضة ، فإن أول عدد قليل من البروتينات المؤتلفة الطبية المحضرة في نظام الإشريكية القولونية تستخدم نظام التعبير هذا. ومع ذلك ، فإن لها أيضًا عيوبها الخاصة.


بادئ ذي بدء ، أثناء عملية التحفيز الحراري ، يتم أيضًا تنشيط التعبير عن بروتين الصدمة الحرارية الإشريكية القولونية ، بما في ذلك الإنزيمات المحللة للبروتين ، لذلك قد يؤدي إلى تدهور البروتين المؤتلف المعبر عنه.

ثانيًا ، عند التخمر بكميات كبيرة وثقافة البكتيريا ، يكون بطيئًا نسبيًا زيادة درجة حرارة المزرعة من 30 درجة مئوية إلى 42 درجة مئوية. قد يؤثر هذا النوع من طرق التسخين على تأثير الحث والتعبير عن البروتين المؤتلف.


بالنسبة لمتطلبات التعبير عن الإشريكية القولونية ، يرجى الاتصال بشركة Generalbiosystems—— شركة تعبير البروتين.