الصفحة الرئيسية > أخبار > اخبار الصناعة

العوامل المؤثرة في تنقية بروتينات الأنسجة النباتية

تحديث الوقت : 2020-12-10

المصدر:

الآراء : 25

العوامل المؤثرة في تنقية بروتينات الأنسجة النباتية

تواجه النباتات بعض المشكلات الخاصة في تنقية البروتين ، مما يجعل مردود البروتين لكل وحدة حجم أقل من إنتاج الحيوانات أو بدائيات النوى ، كما أن تدمير الأنسجة والتدخل في التنقية ووجود مواد طبيعية ذات تأثيرات مؤكسدة يمكن أن يؤثر على نشاط الإنزيم.

من المهم أن تختار بعناية مصدر المادة والطريقة المناسبة لتفتيت الأنسجة. بمجرد أن يصبح البروتين في شكل قابل للفصل ، يمكن معالجة البروتين النباتي مثل البروتينات الأخرى باستخدام طرق التنقية العامة.

purification of plant tissue proteins

تركيز منخفض من البروتين


على عكس معظم الكائنات الحية الأخرى ، فإن الكمية الكبيرة من المادة الصلبة في النباتات ليست بروتينًا ، ولكن مواد جزيئية أخرى بما في ذلك النشا ، والسليلوز ، والبكتين ، والهيميسليلوز ، والبوليفينول.

يجب إجراء التجانس الأولي في كمية كبيرة من المخزن المؤقت للترشيح الأولي. ستؤثر كمية كبيرة من المواد غير القابلة للذوبان على الترشيح بسبب تأثير الهلام أو تأثير الامتزاز البسيط.

لذلك ، يمكن الحصول على تركيز منخفض فقط من البروتين في البداية ، والذي يحتاج إلى ترسيبه أو تركيزه. بعد التجانس ، يتم استخدام ترسيب كبريتات الأمونيوم وترسيب PEG بشكل شائع للبروتينات النباتية.

إذا تم استخدام الترشيح الفائق للتركيز ، فيجب مراعاة قدرة البروتين النباتي على الارتباط بالغشاء لتجنب الآثار السلبية.


تحلل البروتين


أحيانًا يكون لتنقية البروتين النباتي مشكلة تحلل البروتين ، وغالبًا ما يصاحب ذلك انخفاض في تركيز البروتين الأولي ، والذي قد يكون بسبب وقت التشغيل الطويل للخطوة الأولية أو وجود البروتياز.

تشمل الإنزيمات الرئيسية المحللة للبروتين الموجودة في النباتات سيرين بروتياز ، سيستين بروتياز و metalloproteases ، ويمكن استخدام المثبطات المقابلة. 1 مليمول / لتر PMSF مناسب لتثبيط سيرين بروتياز.


تثبيط وتحمير


العديد من أنسجة النبات غنية بالأكسيدات ، التي تعمل على ركائز داخلية لإنتاج منتجات نشطة ، والتي تعطلها بعد التفاعل مع الإنزيمات ، والتي قد تكون جزءًا من آلية الدفاع الطبيعية للنباتات. يوجد بوليفينول أوكسيديز في العديد من النباتات ، مثل البطاطس والتفاح والموز وبنجر السكر ، ويسبب تفاعلات تحمير ، خاصة عند وجود التيروزين الحر.


في نباتات أخرى ، مثل الفاصوليا ، يمكن أن تتسبب كمية كبيرة من البيروكسيديز عندما تنكسر الأنسجة أيضًا في حدوث تفاعل بني. يمكن تقليل تفاعل اللون البني عن طريق إزالة الركيزة أو تثبيط أوكسيديز.

يمكن استخدام الراتينج الموجب (مثل Dowe × 1 × 2) أو راتنج التفاعل الكاردي للماء (مثل Am berlite XAD-2) لإزالة ركيزة التفاعل. يمكن أن يكون مثبط التفاعل ثيول ، 2-مركابتوإيثانول أو ديثيوثريتول ، أو حمض الأسكوربيك (لكن انتبه إلى التأثير على الرقم الهيدروجيني للعازل المتجانس) أو ميتابيسلفيت الصوديوم.