كيفية الحصول على الجين المستهدف

1. تحديد هدف التجربة والغرض منها.

على سبيل المثال ، إذا أردنا تحضير خضروات معدلة وراثيًا ، فيجب علينا اختيار إحدى الخضروات. الطماطم ، باعتبارها أكثر الخضروات إنتاجية في العالم ، لديها الكثير من الأبحاث ذات الصلة.

طريقة التعديل الجيني ناضجة أيضًا. الجميع يحب أكله. يمكن استخدامه كخضروات وفاكهة. إنه مناسب جدًا للنمو في المنزل وهو اختيار جيد جدًا.

2. ابحث عن الجين المستهدف

3. الاستنساخ الجيني

نظرًا لأننا نحتاج إلى تضخيم تسلسل cDNA من أنواع الطماطم ، فهذا يعني أنه يتعين علينا استخراج الحمض النووي الريبي للطماطم ، واستخدام النسخ العكسي لتوسيع cDNA ، ثم استخدام بوليميريز الحمض النووي لتوسيع جزء الجين المزدوج الشريطة.

الكواشف الثلاثة الرئيسية هنا هي النسخ العكسي ، بوليميريز الحمض النووي (المعروف باسم إنزيم PCR) ، وكاشف Trizol لاستخراج الحمض النووي الريبي. يكفي توسع إنزيم PCR لشظايا 2KB مع إنزيم Taq.

ثم حدد أول تسلسل موجب مكون من 30 قاعدة وآخر تسلسل خيط سلبي مكون من 30 قاعدة ، واستخدمهما كتسلسلات أولية ، ثم ابحث عن شركة بيولوجية على الإنترنت يمكنها تصنيع مواد أولية ، مثل Generalbiosystems .

أرسل لهم التسلسل ، وسيتم إرسال البرايمر إليك في غضون يومين. ربما يكون المبدئان أقل من 7 دولارات. ثم اتبع تعليمات إنزيم النسخ العكسي لإجراء النسخ العكسي باستخدام جهاز PCR ، ثم استخدم منتج النسخ العكسي كقالب لتضخيم الجين باستخدام جهاز PCR وفقًا لتعليمات إنزيم PCR.

ثم أنفق 10 دولارات لشراء علامة DNA 5K ومسحوق أجار لتشغيل الجل ، ثم أرسل صبغة (مثل EB) تضاف إلى الجل لتلطيخ الحمض النووي ، ثم قم بتشغيل هلام للتأكد من وجود 2K فرقة.

في هذه المرحلة ، يكون استنساخ الجينات قد اكتمل. إذا كان لديك نقود فائضة ، فيمكنك إرسال منتج PCR هذا إلى الشركة التي تطلب البادئات لاختبار التسلسل وتأكيده.