الصفحة الرئيسية > أخبار > اخبار الصناعة

طرق واحتياطات تنقية البروتين

تحديث الوقت : 2020-10-26

المصدر:

الآراء : 42

طرق واحتياطات تنقية البروتين
تتمثل الخطوة الأولى في أبحاث البروتين في فصل البروتين المستهدف وتنقيته من خليط معقد من الجزيئات الكبيرة للحصول على هدف عالي النقاء مع نشاط بيولوجي. لذلك ، تعد تقنيات وأساليب تنقية البروتين الفعالة أحد الأسس والمفاتيح المهمة لأبحاث البروتين.

طريقة استخلاص البروتين وتنقيته

استخلاص البروتين (بما في ذلك الإنزيمات)

معظم البروتينات قابلة للذوبان في الماء ، وملح مخفف ، وحمض مخفف أو محاليل قلوية ، وقليل من البروتينات المرتبطة بالدهون قابلة للذوبان في المذيبات العضوية مثل الإيثانول ، والأسيتون ، والبيوتانول ، وما إلى ذلك ، لذلك ، يمكن استخدام المذيبات المختلفة للاستخراج والفصل و طهارة. البروتين والإنزيمات.

(1) طريقة استخلاص المحلول المائي

يحتوي المحلول المائي للملح المخفف ونظام المخزن المؤقت على استقرار جيد وقابلية عالية للذوبان للبروتين. إنه المذيب الأكثر استخدامًا لاستخراج البروتين.

الكمية المعتادة هي 1-5 أضعاف حجم المادة الخام. يتطلب الاستخراج تقليبًا موحدًا لتسهيل إذابة البروتين. تعتمد درجة حرارة الاستخراج على طبيعة المكونات النشطة.


من ناحية أخرى ، تزداد قابلية ذوبان معظم البروتينات مع ارتفاع درجة الحرارة. لذلك ، تؤدي درجات الحرارة المرتفعة إلى الذوبان وتقصير وقت الاستخراج.

ولكن من ناحية أخرى ، فإن الزيادة في درجة الحرارة ستؤدي إلى إفساد البروتين وتعطيله. لذلك ، بناءً على هذه النقطة ، يستخدم استخراج البروتينات والإنزيمات عمومًا درجة حرارة منخفضة (أقل من 5 درجات).

من أجل تجنب التحلل أثناء استخلاص البروتين ، يمكن إضافة مثبطات الإنزيم المحللة للبروتين (مثل ثنائي أيزوبروبيل فلوروفوسفات ، حمض أيودواسيتيك ، إلخ).



(2) طريقة استخلاص المذيبات العضوية

بعض البروتينات والإنزيمات التي ترتبط ارتباطًا وثيقًا بالدهون أو التي تحتوي على المزيد من السلاسل الجانبية غير القطبية في الجزيء غير قابلة للذوبان في الماء ، أو محاليل الملح المخففة ، أو الأحماض المخففة ، أو القلويات المخففة.

يمكن استخدام المذيبات العضوية مثل الإيثانول والأسيتون والبيوتانول. لديها بعض المحبة للماء ودهون قوية. إنه محلول مثالي لاستخراج البروتينات الدهنية. ولكن يجب أن تعمل في درجات حرارة منخفضة.


طريقة استخلاص البوتانول هي الأفضل بشكل خاص لاستخراج بعض البروتينات والإنزيمات المرتبطة بشدة بالدهون. إحداها أن البوتانول لديه قابلية قوية للدهون ، خاصة قدرته على إذابة الدهون الفسفورية ؛ والآخر هو أن البوتانول له قابلية للماء ويقع ضمن نطاق الذوبان.

(الدرجة 10٪ ، 40 درجة 6.6٪) لن تتسبب في إفساد الإنزيم وتعطيله. بالإضافة إلى ذلك ، تتميز طريقة استخلاص البوتانول بمجموعة واسعة من خيارات درجة الحموضة ودرجة الحرارة ، كما أنها مناسبة أيضًا للمواد الحيوانية والنباتية والميكروبية.


احتياطات استخلاص البروتين وتنقيته:


عند تنقية أي نوع من البروتين ، يجب الانتباه دائمًا للحفاظ على ثباته وحماية نشاطه. هناك بعض الاحتياطات العامة التي يجب وضعها في الاعتبار. يشملوا:

1. يجب وضع العملية على الجليد أو في مخزن بارد قدر الإمكان.

2. لا تكن مخففًا جدًا ، وحافظ على تركيز البروتين عند ميكروغرام / مل مجم / مل.

3. الأس الهيدروجيني المناسب ، ما لم يتم إجراء كروماتوجرافيا التركيز ، يجب أن يتجنب محلول العازلة المستخدم نفس الرقم الهيدروجيني مثل pI لمنع ترسيب البروتين.

4. استخدام مثبطات الأنزيم البروتيني لمنع البروتياز من تدهور البروتين الهدف ؛ عند تنقية البروتين في الخلية ، أضف DNase لتحطيم الحمض النووي ومنع الحمض النووي من تلويث البروتين.

5. تجنب التجميد والذوبان المتكرر والتحريك القوي للعينة لمنع تمسخ البروتين.

6. تحاكي مكونات محلول العازلة البيئة داخل الخلايا قدر الإمكان.

7. أضف 0.1 ~ 1mmol / LDTT (dithiothreitol) (أو β-mercaptoethanol) إلى المحلول المؤقت لمنع أكسدة البروتين.

8. أضف 1 ~ 10mmol / LEDTA عامل مخلب معدني لمنع المعادن الثقيلة من إتلاف البروتين المستهدف.

9. استخدام محلول معقم لمنع نمو الكائنات الحية الدقيقة.

يمكن أن توفر شركة GeneralBiosystems خدمات مخصصة لتعبير وتنقية البروتين لتلبية معظم احتياجات إنتاج البروتين.