الصفحة الرئيسية > أخبار > اخبار الصناعة

طريقة استنساخ PCR | ميزة | سلبيات

تحديث الوقت : 2020-08-04

المصدر:

الآراء : 87

طريقة استنساخ PCR | ميزة | سلبيات

الفرق بين استنساخ PCR والاستنساخ التقليدي هو أنه يمكن تضخيم شظايا الحمض النووي المستهدفة ، أو حتى النواقل ، عن طريق تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) وربطها معًا دون استخدام إنزيمات التقييد.

يعد استنساخ PCR طريقة سريعة لاستنساخ الجينات ، وعادة ما تستخدم للمشاريع التي تتطلب إنتاجية أعلى ، وإنتاجية هذه المشاريع أعلى من طرق الاستنساخ التقليدية. يسمح باستنساخ شظايا الحمض النووي غير المتوفرة بكميات كبيرة.


عادة ، يتم إجراء تفاعل PCR لتضخيم تسلسل الاهتمام ، ثم يتم توصيله بالمتجه عن طريق ربط متدلي بنهاية حادة أو قاعدة واحدة قبل التحويل.

غالبًا ما يستخدم استنساخ PCR المبكر لبوليميراز DNA Taq لتضخيم الجين.

ينتج عن هذا منتج PCR يتم فيه إضافة بقايا أدينين واحدة (A) إلى النهاية الثالثة لمنتج PCR ، والتي تكون مستقلة عن القالب ، من خلال الإجراء العادي للبوليميراز.

يتم بعد ذلك ربط هذه المنتجات "A-tail" بناقل T-tail مكمل باستخدام T4 DNA ligase ، ثم يتم تحويلها.


الآن ، تُستخدم بوليمرات الحمض النووي عالية الدقة أيضًا بشكل شائع لتضخيم التسلسلات التي لا تحتوي على منتجات PCR 3 تمديد.

يتم ربط الجزء ذو النهايات غير الحادة بناقل البلازميد عن طريق تفاعل ربط نموذجي أو عن طريق عمل ناقل "منشط" يحتوي على إنزيم مرتبط تساهميًا (عادةً topoisomerase I) ، مما يسهل المتجه: إدراج الربط.

تحتوي بعض أنظمة استنساخ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) على نواقل "انتحارية" هندسية تشتمل على جين سام يجب ربط منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل بنجاح للسماح بانتشار السلالات التي تمتص الجزيء المؤتلف أثناء عملية التحول.


هناك عيب نموذجي تشترك فيه العديد من طرق استنساخ PCR وهو أنه يجب استخدام نواقل خاصة.

عادة ما يتم بيع هذه النواقل من قبل البائعين (مثل NEB) بتنسيقات خطية جاهزة للاستخدام ويمكن أن تضيف تكاليف كبيرة إلى التكلفة الإجمالية للاستنساخ.

وبالمثل، واستخدام ناقلات جمعية مهندسي البترول cific يحد من الخيارات الباحثين عن المقاومة للمضادات الحيوية، هوية المروج، شركاء الانصهار والعناصر التنظيمية الأخرى.

ميزة استنساخ PCR :


✧ فعال ، مع ناقل مخصص
مناسب للإنتاجية العالية

عيوب استنساخ PCR :

اختيار ناقلات محدودة
تكلفة أعلى
عدم التحكم في التسلسل عند التقاطع
الاستنساخ متعدد الأجزاء ليس بالأمر السهل
استنساخ اتجاهي صعب