طريقة تصميم استنساخ PCR التمهيدي

استنساخ PCR هو تقنية بيولوجيا جزيئية تضخّم وتوسع أجزاء معينة من الحمض النووي ، وتستخدم على نطاق واسع في البيولوجيا الجزيئية والمجالات ذات الصلة.

من بينها ، يعد استنساخ PCR التمهيدي عاملاً مهمًا في عملية تفاعل توسع PCR. لذلك ، قبل أن تبدأ تجربة استنساخ PCR رسميًا ، من الضروري إتقان طريقة تصميم تمهيدي استنساخ PCR الصحيح.

عملية تصميم استنساخ PCR:

على سبيل المثال ، برنامج التصميم التمهيدي Prime Premier 5.0 قوي وسهل الاستخدام. يمكنه مقارنة تصميم البادئات وتقييمه بشكل شامل. إنه أحد البرامج الأكثر استخدامًا لتصميم التمهيدي.

احتياطات التصميم التمهيدي لاستنساخ PCR:

يتم الحفاظ على طول التمهيدي بشكل أساسي بين 18-24 نقطة أساس. إذا كان طول تسلسل التمهيدي قصيرًا جدًا ، فقد يتمدد ويؤثر على معدل تمدد استنساخ PCR ؛ إذا كان طول التمهيدي طويلًا جدًا ، فلا يمكن زيادة تقليل التمهيدي ، ولكن التسلسل الطويل جدًا سيؤدي إلى عدم التطابق ويقلل من معدل تمدد استنساخ PCR.

لذلك ، فإن قيمة Tm المناسبة هي 55-80 درجة مئوية ، ويجب أن يكون فرق درجة حرارة البدء بين المنبع والمصب في حدود 10 درجة مئوية.

لذلك ، سيؤثر محتوى GC للتمديد على درجة حرارة انصهار قليل النوكليوتيد أثناء عملية استنساخ PCR ، أي قيمة Tm.

بشكل عام ، يتراوح محتوى GC للامتداد بين 40٪ -60٪ ، ويكون اختلاف محتوى GC بين البادئات الأولية والنهائية في حدود 20٪ ، مما قد يؤدي إلى زيادة محتوى التمهيدي.

إذا حدث هذا ، فقد يحدث عدم تطابق أثناء عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل ، مما سيؤثر على دقة تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل.

تستخدم منصة Generalbiosystems تقنية استنساخ حاصلة على براءة اختراع لمساعدة العملاء على استنساخ الجين المستهدف في أي موضع محدد على الناقل المطلوب دون الاعتماد على مواقع تقييد النواقل لتلبية خطط تصميم الاستنساخ المختلفة للعملاء.