الصفحة الرئيسية > أخبار > اخبار الصناعة

احتياطات لتنقية البروتين في خلايا الثدييات

تحديث الوقت : 2020-12-07

المصدر:

الآراء : 31

احتياطات لتنقية البروتين في خلايا الثدييات
تقدم هذه المقالة بشكل أساسي الاحتياطات اللازمة لتنقية البروتين p في خلايا الثدييات .

يمكن تلخيص الخصائص الرئيسية للبروتين المؤتلف الذي تنتجه الخلايا الحيوانية العامة على النحو التالي: يفرز في وسط المزرعة بشكل طبيعي ومطوي بشكل صحيح ؛ تعديل ما بعد الترجمة الصحيح ؛ لا قيود على الوزن الجزيئي للبروتين المؤتلف ؛ لا تنتج خلايا الثدييات السموم الداخلية ؛ تركيز منخفض للمنتج الثقافة قد يكون محتوى البروتين في القاعدة مرتفعًا ؛ قد تحتوي عملية الإنتاج على فيروسات أو دنا أو بروتينات خلوية ، والتي يجب إزالتها من خلال العمليات النهائية.

mammalian cells


يجب ألا تكون استراتيجيات تنقية البروتين المشتقة من خلايا الثدييات قادرة على التكاثر فحسب ، بل يجب أن تلبي متطلبات نقاء معينة وأشكالًا معينة ، ولكن أيضًا تقضي على الملوثات الضارة المحتملة التي قد تنشأ من عملية التحضير ، بما في ذلك البروتينات الحيوانية ، والفيروسات ، والفيروسات في الخلايا أو الثقافات. . الحمض النووي ، أو المضادات الحيوية لزراعة الخلايا ، إلخ. تحتاج الأمور التالية إلى الاهتمام:


① متطلبات النظافة ، يجب أن تكون جميع خطوات الفصل قادرة على العمل في ظل ظروف هادئة ، ويجب عدم إدخال حمولة حيوية أو سم داخلي.

يجب أن تكون المواد الخام المنقاة معقمة ، ويجب أن يكون محتوى الذيفان الداخلي منخفضًا جدًا ، ويجب عدم استخدام المضادات الحيوية.


② يجب تنظيف وإزالة مواد المعالجة التي لا يمكن تعقيمها بالبخار (مثل ناقلات الكروماتوغرافيا) بطرق أخرى فعالة.

تتضمن الطرق النموذجية المعالجة بمحلول مطهر مثل 0.2 ~ 0.5 مول / لتر هيدروكسيد الصوديوم أو إيثانول حمضي (60٪ إيثانول / 0.5 مول / لتر حمض أسيتيك) وهيدروكسيد الصوديوم / خليط إيثانول (مثل 50٪ إيثانول / 0.2 مول / لتر هيدروكسيد الصوديوم ). يمكن استخدامه ، ووقت العلاج بشكل عام 4-24 ساعة في درجة حرارة الغرفة.


③ تضمن سلامة العملية أن المنتج يمكن أن ينتقل مباشرة من خطوة تشغيل إلى أخرى ، دون عمليات إضافية في المنتصف ، وهو أمر مثالي.


④ بغض النظر عن القوة الميكانيكية أو ظروف الاستزراع غير المواتية ، تكون خلايا الثدييات أضعف بكثير من الخلايا الميكروبية ، لذلك يجب توخي الحذر للحفاظ على الخلايا سليمة.

من الضروري التحكم بعناية في ظروف الثقافة وفصل الخلايا لتجنب تلوث المنتج بالبروتينات داخل الخلايا التي يتم إطلاقها بسبب تحلل الخلية.


تتضمن مخططات التنقية النموذجية للبروتينات المؤتلفة أو الأجسام المضادة وحيدة النسيلة التي تنتجها زراعة الخلايا الثديية أو الحيوانات المعدلة وراثيًا بشكل عام الفصل الأولي (الترشيح أو الطرد المركزي ، تركيز الترشيح الفائق) ، التبادل الأيوني (أو التقارب) اللوني ، الترشيح الهلامي ، إلخ. منتج بدرجة نقاء 99 يتم الحصول على٪ إلى 100٪.