الصفحة الرئيسية > أخبار > أخبار الشركة

علامات تنقية التعبير البروتيني

تحديث الوقت : 2020-11-10

المصدر:

الآراء : 43

علامات تنقية التعبير البروتيني
تستخدم بعض الببتيدات والبروتينات على نطاق واسع في الإنتاج الضخم للبروتينات المؤتلفة. يتم دمجها مع البروتين المستهدف لتسهيل التعبير والكشف عن وتتبع وتنقية البروتين المستهدف. تسمى هذه الببتيدات أو البروتينات علامات البروتين. يمكن لشركة Generalbiosystems استخدام مجموعة متنوعة من علامات تعبير البروتين وفقًا لاحتياجات العملاء ، بما في ذلك His ، و Sumo ، و GST ، و MBP ، وما إلى ذلك ، لتوفير خدمات تعبير وتنقية البروتين المخصصة .

6 * علامته:


6 * يشير إلى علامة اندماج تتكون من ستة بقايا هيستيدين ، والتي يمكن إدخالها عند الطرف C أو الطرف N للبروتين المستهدف.

كعلامة ، على المرء أن يشكل حاتمة لتسهيل التنقية والكشف ؛ والآخر هو تكوين خاصية هيكلية فريدة (يجند ملزم) لتسهيل التنقية.

تمتلك السلسلة الجانبية من بقايا الهيستيدين جاذبية قوية للنيكل الصلب ويمكن استخدامها في الفصل الكروماتوغرافي باستخلب المعدن الثابت (IMAC) لفصل وتنقية البروتينات المؤتلفة.


استخدام وسمه له الخصائص التالية:


1. الوزن الجزيئي للعلامة صغير ، فقط ~ 0.84 دينار كويتي ، والذي لا يؤثر بشكل عام على وظيفة البروتين المستهدف ؛

2. يمكن تنقية بروتين الاندماج الخاص به في وجود مواد خافضة للتوتر السطحي غير أيونية أو في ظل ظروف تغيير طبيعة. يستخدم الأول في تنقية البروتينات شديدة المقاومة للماء ، والأخير مفيد بشكل خاص في تنقية بروتينات الجسم المتضمنة.

بعد إذابة المُحول ، تتم إزالة بروتين الشوائب عن طريق كروماتوجرافيا تقارب المعادن باستخلاب المعدن ، بحيث لا تتدخل البروتينات الأخرى في إعادة التشبع ، أو يتم إعادة تشبع كروماتوجرافيا تقارب المعدن ؛


3. يستخدم بروتين الاندماج الخاص به أيضًا في دراسة تفاعلات البروتين والبروتين والحمض النووي.

4. وسمته ذات مناعة منخفضة نسبيًا ، ويمكن حقن البروتين المنقى مباشرة في الحيوانات من أجل التحضير المناعي للأجسام المضادة ؛

5. يمكن تطبيقها على مجموعة متنوعة من أنظمة التعبير ، مع ظروف تنقية معتدلة.

6. يمكن استخدامه مع علامات التقارب الأخرى لإنشاء علامات تقارب أبوية.

علامة ضريبة السلع والخدمات :


بروتين علامة GST (الجلوتاثيون سلفهيدريل ترانسفيراز) نفسه هو عبارة عن مادة ترانسفيراز تلعب دورًا مهمًا في عملية إزالة السموم ، وحجمها الطبيعي هو 26 دينار كويتي. وهي تستخدم أساسا في التعبير بدائية النواة.

هناك سببان تقريبًا لتطبيقه في التعبير بدائية النواة.

السبب الأول هو أنه بروتين قابل للذوبان بدرجة عالية ، ومن المأمول أنه يمكن استخدامه لزيادة قابلية ذوبان البروتينات الأجنبية ؛ والآخر هو أنه يمكن استخدامه في الأمعاء الغليظة. تلعب كمية كبيرة من التعبير في العصيات دورًا في زيادة كمية التعبير.


يستخدم نظام التعبير الاندماجي GST على نطاق واسع في التعبير عن بروتينات الاندماج المختلفة ، ويمكن التعبير عنها في الخلايا المضيفة مثل الإشريكية القولونية والخميرة.

تمت التصفية من بروتين الاندماج المرتبط بـ 10 ملي مولار من الجلوتاثيون المخفض تحت ظروف غير متغيرة الطبيعة. في معظم الحالات ، يكون بروتين الاندماج قابلاً للذوبان في محلول مائي ويشكل ثنائياً.


يمكن اكتشاف علامات GST بسهولة عن طريق التحليل الإنزيمي أو المقايسة المناعية. تساعد العلامات في حماية البروتينات المؤتلفة من التدهور بواسطة البروتياز خارج الخلية وتحسين استقرارها. في معظم الحالات ، يكون بروتين الاندماج GST قابل للذوبان كليًا أو جزئيًا.

التنقية: يمكن تنقية البروتين الموسوم GST الذي يعبر عنه نظام التعبير مباشرة من المحللة البكتيرية باستخدام راتينج تقارب يحتوي على الجلوتاثيون المختزل (الجلوتاثيون سيفروز).

يمكن استخلاص البروتينات الموسومة بعلامة GST في ظل ظروف معتدلة غير مفسدة للطبيعة ، لذلك يتم الاحتفاظ باستضداد البروتين والنشاط البيولوجي للبروتين.

ستفقد GST قدرتها على الارتباط براتنج الجلوتاثيون في ظل ظروف تغيير طبيعة ، لذلك لا يمكن إضافة عوامل تغيير طبيعة قوية مثل هيدروكلوريد الجوانيدين أو اليوريا إلى المخزن المؤقت للتنقية.


إذا كنت ترغب في إزالة جزء الانصهار GST ، يمكنك استخدام استئصال البروتياز الخاص بالموقع.

الاكتشاف: يمكن استخدام الجسم المضاد GST أو الجسم المضاد المحدد للبروتين المستهدف للكشف عنه.

علامة سومو :


بروتين علامة سومو عبارة عن مُعدِّل جزيء صغير يشبه اليوبيكويتين (مُعدِّل يشبه سمولوبيكويتين) ، وهو أحد الأعضاء المهمة في عائلة يوبيكويتين بولي ببتيد السلسلة الفائقة.

في البنية الأولية ، يحتوي كل من SUMO و ubiquitin على 18 ٪ فقط من التماثل ، لكن البنية الثلاثية والوظائف البيولوجية للاثنين متشابهة جدًا.

لقد وجدت الدراسات أنه يمكن استخدام سومو كعلامة اندماج وكائن جزيئي للتعبير عن البروتين المؤتلف.

لا يمكنها فقط زيادة التعبير عن بروتين الاندماج ، ولكن لها أيضًا وظائف مقاومة التحلل المائي للبروتياز ، وتعزيز الطي الصحيح للبروتين المستهدف ، وتحسين قابلية ذوبان البروتين المؤتلف.


بالإضافة إلى ذلك ، فإن تطبيق سومو مهم ، أي أنه يمكن استخدامه لإزالة بروتين العلامة تمامًا للحصول على البروتين الطبيعي.

لأن إنزيم SUMO المحلل للبروتين يمكنه التعرف على تسلسل بروتين علامة SUMO الكامل ، ويمكنه قطع SUMO بكفاءة من بروتين الاندماج.

بعد إزالة سومو ، بعد كروماتوغرافيا التقارب ، يتم إزالة جزء بروتين العلامة ، والبروتين المؤتلف هو نفس البروتين الطبيعي.

لذلك ، غالبًا ما تُستخدم علامة SUMO جنبًا إلى جنب مع علامات أخرى ، كموقع هضم إنزيمي محدد.


علامة MBP :


يبلغ حجم بروتين علامة MBP (بروتين ربط المالتوز) 40 كيلو دالتون ويتم ترميزه بواسطة جين malE الخاص بـ E.coli K12. يمكن أن يزيد MBP من قابلية ذوبان بروتينات الاندماج المفرطة في البكتيريا ، وخاصة البروتينات حقيقية النواة. يمكن اكتشاف ملصق MBP بسهولة عن طريق المقايسة المناعية. من الضروري لصق العلامة ببروتياز خاص بالموقع. إذا تم التعبير عن البروتين في البكتيريا ، فيمكن دمج MBP مع الطرف N أو الطرف C للبروتين.

التنقية: يمكن تنقية بروتين الاندماج عن طريق طبقة تقارب النشا المتشابكة. يمكن استخلاص بروتين الاندماج المرتبط بـ 10 ملي مالتوز في المخزن الفسيولوجي. تقارب الربط في النطاق الميكرومولار. لا يمكن لبعض بروتينات الاندماج أن ترتبط بشكل فعال بوجود 0.2٪ Triton X-100 أو 0.25٪ Tween 20 ، بينما لا تتأثر بروتينات الاندماج الأخرى. حالة المخزن المؤقت هي درجة الحموضة 7.0 إلى 8.5 ، ويمكن أن يصل تركيز الملح إلى 1 متر ، لكن لا يمكن استخدام المواد المذيبة. إذا كنت ترغب في إزالة جزء الانصهار MBP ، فيمكنك استخدام استئصال البروتياز الخاص بالموقع.

الكشف: يمكن استخدام الجسم المضاد لـ MBP أو الجسم المضاد المحدد للبروتين المستهدف للكشف.