الصفحة الرئيسية > أخبار > اخبار الصناعة

عدة استراتيجيات فعالة للتعبير عن البروتين

تحديث الوقت : 2020-10-28

المصدر:

الآراء : 45

عدة استراتيجيات فعالة للتعبير عن البروتين
ينقع المنتدى كل يوم ويتم إجراء التجربة كل يوم ، ولكن لا يزال البروتين غير واضح؟

يقدم المحرر بموجب هذا العديد من الاستراتيجيات الفعالة ، والتي تعتبر فعالة للغاية للحصول على بروتين مؤتلف وظيفي عالي الإنتاجية!

يتغلب نظام التعبير عن الثدييات على مشكلة التعديل اللاحق للترجمة لتعبير البروتين في نظام التعبير بدائية النواة.

البروتين المعبر عنه له وظائف الطي والتعديل ، وهو أنساني للغاية ، ويمكن استخدامه للتحليل الهيكلي والوظيفي.

عادة ما توجد طريقتان للتعبير عن البروتينات في خلايا الثدييات: تعبير عابر وترنسفكأيشن مستقر (بناء خطوط خلوية مستقرة).


يمكن أن يؤدي استخدام تعداء الخلايا المستقرة لنقل الجينات الأجنبية إلى كروموسومات الخلية إلى إنتاج البروتين المستهدف بثبات لفترة طويلة. ومع ذلك ، فإن تكلفة التجربة عالية ، والدورة طويلة ، والعملية صعبة.

يعني التعبير البروتيني العابر أن الجين الأجنبي موجود على الناقل الحر ولم يتم نقله إلى كروموسومات الخلية.

بعد بناء البلازميد ، يمكن الحصول على البروتين المستهدف من خلال خطوات استعادة الخلايا ، وترنسفكأيشن ، وزراعة الخلايا ، وتنقية البروتين.

العملية بسيطة ، وتكلفة التجربة منخفضة ، والدورة قصيرة. إنه أكثر ملاءمة للتحضير السريع والصغير لكمية معينة من البروتين المؤتلف والأجسام المضادة المؤتلفة.


تعال وشاهد كيفية تحسين تعبير البروتين العابر!

الإستراتيجية 1: تحسين تسلسل الترميز

وفقًا لتطبيق المصب المحدد ، صمم أفضل تسلسل تشفير وحدد ناقل التعبير الأنسب. قبل البدء في التعبير عن البروتين ، يمكن أن يؤدي استخدام خوارزميات تحسين الكودون (مثل OptimumGene ™ أو GenSmart Codon Optimization) ودليل تحديد ناقل التعبير إلى توفير الوقت والجهد والنفقات.
هل تعرف؟ يمكن أن توفر GeneralBiosystems خدمات متكاملة من التخليق الجيني (تحسين الكودون المجاني) إلى التعبير عن البروتين وتنقيته !

الإستراتيجية 2: تحسين قابلية ذوبان البروتين

انخفاض قابلية الذوبان في البروتين هو عامل رئيسي يسبب انخفاض إنتاج البروتين المؤتلف. نقترح تعديل بعض معلمات حالة التعبير الشائعة الاستخدام لتحسين قابلية ذوبان البروتين.

درجة الحرارة:

بالنسبة إلى HEK293 وخطوط خلايا الثدييات الأخرى ، يوصى بزراعة الخلايا في حاضنة 37 درجة مئوية ، 5٪ CO2. أظهرت بعض الدراسات أن احتضان درجة الحرارة من 37 درجة مئوية إلى 33 درجة مئوية بعد 24 ساعة من تعداء العدوى يمكن أن يزيد من التعبير البروتيني لخلايا HEK293.

على الرغم من أن الوسائط القاعدية التي يوفرها موردون مختلفون متشابهة جدًا ، إلا أن الاختلافات الطفيفة بينها قد تؤثر على نمو خطوط خلايا محددة معبرة.

تأكد من تحسين التركيز ودرجة الحموضة والنوع وحتى عدد الدُفعة أو الدُفعة من المكونات الخارجية ، مثل المصل المضاف إلى وسط الثقافة.


إضافات متوسطة:

في بعض الحالات ، نوصي بإضافة كواشف معينة إلى الوسط لزيادة تعبير البروتين. على سبيل المثال ، يمكن أن تؤدي إضافة مثبطات هيستون ديسيتيلاز إلى إزالة بلمرة الكروماتين وزيادة نشاط النسخ للجينات المتكاملة. بدلاً من ذلك ، يمكن أن تساعد إضافة عوامل نمو محددة إلى الوسط في زيادة إنتاج البروتين.

الإستراتيجية 3: استخدم شريك الاندماج

علامات البروتين عبارة عن سلاسل ببتيد قصيرة يتم إدخالها في بروتينات مؤتلفة ويمكن استخدامها لزيادة تعبير البروتين. عادة ما يتم إزالته عن طريق هضم الإنزيم أو الكواشف الكيميائية في نهاية تعبير البروتين.

يعتمد اختيار التسمية الصحيحة لنظام تعبير معين على العديد من العوامل. إذا كان الهدف هو الحصول على عوائد عالية للغاية ، فأنت بحاجة إلى استخدام علامات إزالة الذوبان.

على سبيل المثال ، تمتلك ضريبة السلع والخدمات إشارة بدء ترجمة قوية ويمكن أن تعزز التعبير عالي المستوى. ومع ذلك ، إذا كان مستوى التعبير الأدنى مطلوبًا ، فمن المستحسن استخدام علامات حلقية أكثر صرامة ، مثل علاماته.


الإستراتيجية 4: تحسين طريقة التنقية

تصميم طرق تنقية مختلفة وفقًا لتطبيقات المصب ومتطلبات النقاء.

إذا كان مستوى تعبير البروتين مرتفعًا ، فيمكن استخدام طريقة تنقية التقارب ذات الخطوة الواحدة للحصول على كمية كافية ونقاء من البروتين لتلبية مختلف التطبيقات النهائية.

إذا كانت هناك حاجة إلى مزيد من التنقية ، فيمكن عادةً إجراء كروماتوغرافيا استبعاد الحجم (SEC) بعد تنقية التقارب. لمزيد من التنقية ، يمكن استخدام كروماتوغرافيا التبادل الأيوني (Ion Exchange ، IEX).