الصفحة الرئيسية > أخبار > أخبار الشركة

عملية تقنية الاستنساخ الفرعي — النظم الحيوية العامة

تحديث الوقت : 2020-08-14

المصدر:

الآراء : 77

عملية تقنية الاستنساخ الفرعي — النظم الحيوية العامة

تشير تقنيةSu bcloning إلى إعادة استنساخ شظايا الحمض النووي للجينات في حالة الحصول عليها ، وذلك لتحليل أو إعادة تجميع DNA الجين المستهدف. تقنية الاستنساخ الفرعي هي أيضًا تقنية استنساخ جزيئي.

يسمح ظهور هذه التقنية للناس بإجراء دراسة أكثر تعمقًا لتسلسل الحمض النووي للجينات ، وتوضيح وظيفة الجينات ، وتحليل النمط الظاهري للكائنات من منظور وراثي.


تنقسم العملية التقنية للاستنساخ الفرعي بشكل أساسي إلى أربع خطوات: الحصول على الجزء المستهدف ، وربط المتجه المهضوم والجزء المستهدف ، والانتقال إلى الخلايا المضيفة ، والتحديد والفحص.


طريقة الحصول على الشظية المستهدفة

الحصول على جزء الجين المستهدف مباشرة من مكتبة الجينات ؛

باستخدام تقنية PCR ، استخدم mRNA كقالب لعكس نسخ تسلسل cDNA للحصول على مكتبة cDNA للحصول على الجين المستهدف ؛

استخدم إنزيمات التقييد لتقطيع DNA المتبرع إلى أجزاء كثيرة وإدخالها في الخلايا. بعد الفحص ، يتم الحصول على الخلايا التي تحتوي على الجين المستهدف ؛

يتم الحصول على معلومات تسلسل الجينات ويتم إجراء التوليف الاصطناعي في المختبر.


ربط ناقل الهضم والجزء المستهدف

اختر نوكلياز التقييد المناسب لقص تسلسل جزء الهدف من المتجه. في ظل الظروف العادية ، سيكون هناك ثلاث حالات: نهاية لزجة متماثلة ونهاية لزجة غير متماثلة ونهاية غير حادة. في تجارب الاستنساخ الفرعي ، يُفضل ربط الطرف اللزج غير المتماثل ، والذي يمكن أن يوجه الحمض النووي الغريب إلى الناقل.


نقل إلى الخلايا المضيفة

عادة ما تكون هناك طريقتان لنقل الناقل المرتبط بالجين المستهدف إلى الخلايا: التحويل / تعداء الجسم والتنقل.

التحول / تعداء هو نقل البلازميدات المؤتلفة أو العاثيات إلى الخلايا المضيفة المعالجة ؛ طريقة التنبيغ هي إصابة الخلايا المضيفة بالفيروسات التي تحمل الحمض النووي الغريب. بشكل عام ، يكون التوصيل أكثر كفاءة من طرق التحويل.


فحص تحديد الهوية

عادة ما يستخدم فحص الخلايا المستنسخة الفرز المباشر. يحتوي الناقل على علامات جينية يمكن تحديدها ، والتي يمكنها بشكل فعال تمييز وفصل الجزيئات المؤتلفة عن الخلايا الأصلية.

بعد أن تحمل بعض الجزيئات الحاملة جينات أجنبية ، فإن لون المستعمرات أو اللويحات المتكونة له تغيرات واضحة ، مثل اللون الأزرق إلى عديم اللون ، ويمكن للتغيرات الظاهرية في اللون أن تميز بوضوح الجزيئات المؤتلفة.

بالإضافة إلى ذلك ، هناك بعض طرق فحص الأدوية الأخرى التي يمكنها فحص الخلايا المستنسخة بفعالية من خلال الظواهر المظهرية.



تمتلك شركة Generalbiosystems فريقًا تقنيًا من ذوي الخبرة ومنصة تخليق جيني حاصلة على براءة اختراع ، والتي يمكن أن توفر للعملاء خدمات الاستنساخ الفرعي الشاملة بما في ذلك تخليق الجينات المستهدفة وبناء ناقلات وتحويل وتحديد وفحص.

في خدمة الاستنساخ الفرعي ، سيتم تسليم 4 ميكروغرام من DNA البلازميد المسحوق الجاف أو بكتيريا الجلسرين أو البكتيريا المثقوبة التي تحتوي على البلازميدات ونتائج التسلسل (تنسيق ab1) ووثائق التحقق من هضم الإنزيم التي اجتازت فحص مراقبة الجودة. ستزود شركة Generalbiosystems العملاء بخدمات الاستنساخ الفرعي الدقيقة والسريعة.