الصفحة الرئيسية > أخبار > اخبار الصناعة

خصائص التطبيق لعلامات تنقية وتعبير البروتين المختلفة

تحديث الوقت : 2020-11-13

المصدر:

الآراء : 39

خصائص التطبيق لعلامات تنقية وتعبير البروتين المختلفة
تشير علامة البروتين إلى البروتين أو عديد الببتيد المعبر عنه بالاندماج مع البروتين المستهدف أثناء تحضير البروتين المؤتلف. وظائف بروتين العلامة بشكل عام هي: تعزيز قابلية ذوبان البروتين المستهدف واستقراره ؛ لتسهيل اكتشاف البروتين المستهدف ؛ ولتسهيل تنقية البروتين المستهدف والتعبير عنه .

علامة بروتين الوزن الجزيئي الصغيرة

هذا النوع من العلامات هو بشكل عام تسلسل متعدد الببتيد ، وتتمثل وظيفته الرئيسية في تسهيل تنقية البروتين ويمكن أيضًا استخدامه للكشف عن البروتين وتحديده.

نظرًا لوزنه الجزيئي الصغير ، فإنه لا يؤثر أساسًا على بنية البروتين المستهدف ، ويتم التعبير عنه عمومًا على أنه اندماج مع بروتين ذي وزن جزيئي أكبر.

عادةً ما تتضمن علامات الجزيء الصغيرة: 6 * علامته ، وعلامة العلم ، وعلامة c-Myc ، وعلامة HA ، وعلامة Arg6 ، و AviTag ، وما إلى ذلك. العلامات الأكثر استخدامًا هي 6 * علامته وعلامة العلم وعلامة c-Myc.


علامة HIS
التطبيق الرئيسي: يستخدم بروتين الانصهار الخاص به أيضًا في أبحاث تفاعل البروتين والبروتين والحمض النووي.
ميزات:
1. الوزن الجزيئي للملصق صغير.
2. يمكن تنقيته في وجود / تغيير طبيعة المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية. الأول يستخدم في تنقية البروتينات شديدة المقاومة للماء ، والأخير مفيد بشكل خاص في تنقية بروتينات الجسم المتضمنة ؛
3. يمكن تطبيقها على مجموعة متنوعة من أنظمة التعبير ، مع ظروف تنقية معتدلة.
4. يمكن استخدامه مع علامات التقارب الأخرى لإنشاء علامات تقارب الوالدين ؛
5. المناعة منخفضة نسبيا.

علامة العلم
التطبيقات الرئيسية: تستخدم على نطاق واسع في التعبير عن البروتين وتنقيته وتحديده وبحث وظيفي وتفاعلات البروتين والمجالات الأخرى ذات الصلة ، مع كفاءة تعبير أعلى في أنظمة التعبير حقيقية النواة.
ميزات:
1. لا يتفاعل عادةً مع البروتين المستهدف ، وهو أمر ملائم للباحثين لإجراء بحث نهائي على بروتين الاندماج.
2. يمكن أن يخضع البروتين المستهدف مباشرة للكروماتوغرافيا التقارب بواسطة FLAG. هذا الكروماتوغرافيا هو تنقية غير تغيير طبيعة ، والتي يمكن أن تنقية بروتين الاندماج النشط بكفاءة تنقية عالية.
3. يمكن التعرف عليه من خلال الأجسام المضادة لـ FLAG ، لذلك يمكن الكشف عن بروتين الاندماج المحتوي على FLAG وتحديده بواسطة Western Blot و ELISA وطرق أخرى.
4. يمكن استئصال FLAG المندمج في الطرف N بواسطة enterokinase (DDDK) للحصول على بروتين مستهدف محدد.

نظرًا لأن علامة الوزن الجزيئي الصغيرة لا تؤثر على بنية البروتين ، فإنها لا تحتاج إلى إزالتها بشكل عام ، والتي يمكن أن تحقق إنتاجًا على نطاق واسع.

توجد أجسام مضادة صغيرة لعلامة الوزن الجزيئي في السوق ، والتي يمكن أن تسهل اكتشاف تعبير البروتين. لذلك ، يتم استخدام علامات الوزن الجزيئي الصغيرة في التجارب والإنتاج. الأكثر استخدامًا.


بطاقة وزن جزيئي كبير

تتمثل الوظيفة الرئيسية لبروتين علامة الوزن الجزيئي الكبير في تعزيز قابلية ذوبان البروتين المستهدف ، وتعزيز الطي الصحيح للبروتين ، وتحسين الاستقرار ، ويمكن أن تزيد علامة الوزن الجزيئي الكبيرة من التعبير عن البروتين.

عادةً ما يتم ربط بروتين العلامة الجزيئية الكبيرة بالبروتين المستهدف عن طريق مواقع التقييد ، وهو مناسب للاستئصال بعد التعبير والتنقية.

بسبب الوزن الجزيئي الكبير للعلامة ، قد يؤثر التركيب المكاني على البروتين المستهدف ، ويمكن أيضًا استخدامه بين بروتين العلامة والبروتين المستهدف.

إضافة ارتباط الببتيدات بين. العلامات الجزيئية الشائعة هي: علامة GST ، علامة Sumo ، علامة TrxA ، علامة MBP ، إلخ.


علامة ضريبة السلع والخدمات
التطبيق الرئيسي: يستخدم نظام التعبير الاندماجي GST على نطاق واسع في التعبير عن بروتينات الاندماج المختلفة ، ويمكن التعبير عنها في الخلايا المضيفة مثل الإشريكية القولونية والخميرة.
ميزات:
1. إنه بروتين عالي الذوبان.
2. يمكن التعبير عنها بكميات كبيرة في E. coli ، والتي يمكن أن تزيد من مستوى التعبير.
3. في معظم الحالات ، يكون بروتين الاندماج قابل للذوبان في محلول مائي ويشكل ثنائيات.

يمكن اكتشاف علامات GST بسهولة عن طريق التحليل الإنزيمي أو المقايسة المناعية. تساعد العلامات في حماية البروتينات المؤتلفة من التدهور بواسطة البروتياز خارج الخلية وتحسين استقرارها.

في معظم الحالات ، يكون بروتين الاندماج GST قابل للذوبان كليًا أو جزئيًا.


علامة السومو
بروتين علامة سومو هو معدل صغير يشبه اليوبيكويتين ، وأحد الأعضاء المهمة في عائلة يوبيكويتين متعددة الببتيد. يمكن استخدامه كعلامة بروتين أو كموقع لانقسام الإنزيم والتحلل المائي.
ميزات:
1. زيادة التعبير عن بروتين الاندماج
2. مقاومة للتحلل المائي بالبروتياز ، وبالتالي تعزيز الطي الصحيح للبروتين المستهدف
3. تحسين قابلية الذوبان في الماء للورقة الوجهة
4. يمكن إزالته بالكامل بواسطة إنزيم SUMO المحلل للبروتين للحصول على البروتين المستهدف بدون ملصق

تلعب علامات البروتين دورًا مهمًا للغاية في إنتاج البروتينات المؤتلفة ، مما يتيح التعبير عن البروتينات المختلفة وتنقيتها.

في اختيار العلامات أثناء التجربة ، يمكن تحديد العلامات وفقًا للغرض من التجربة.

يمكن أن تستند خدمة التعبير البروتيني للأنظمة الحيوية العامة إلى تجارب العملاء. الغرض ، تخصيص خطة مناسبة لتعبير البروتين ، والتعبير السريع عن البروتين المستهدف من خلال العلامات المناسبة.