الصفحة الرئيسية > أخبار > اخبار الصناعة

كيفية تحضير بلازميدات عالية الجودة؟

تحديث الوقت : 2021-01-12

المصدر:

الآراء : 50

كيفية تحضير بلازميدات عالية الجودة؟
تعلمك خبرة GeneralBiosystems في الصناعة كيفية تحضير بلازميدات عالية الجودة.

عادة ما يتضمن تحضير البلازميدات من المزارع البكتيرية خطوتين: التحلل البكتيري وتنقية DNA البلازميد. التحلل القلوي هو الطريقة الأكثر استخدامًا لتحلل الخلايا في المستحضرات صغيرة الحجم. ومع ذلك ، هناك العديد من الطرق لخطوات تنقية DNA البلازميد ، وهذه الطرق لها مزاياها وعيوبها ، والتي قد تؤثر على تطبيق البيولوجيا الجزيئية النهائية.

بعد تحلل الخلية وتحييدها ، ستترسب كمية صغيرة من الحمض النووي الصبغي ذو الحجم الفائق وبروتينات الخلية المشوهة من المحلول معًا ، بينما لا يزال البلازميد في المحلول ، ومن ثم يمكن فصل الراسب بسهولة عن المحلول عن طريق الطرد المركزي أو الترشيح.

يتم فصل محلول DNA البلازميد. ولكن في هذا الوقت لا يزال DNA البلازميد مختلطًا بالبروتينات الخلوية المتبقية والحطام والملح و EDTA و RNase.


لذلك ، خطوات التنقية اللاحقة مطلوبة لإزالة الشوائب الأخرى من DNA البلازميد. هناك ثلاث طرق تنقية شائعة الاستخدام على النحو التالي:

طريقة استخراج الفينول كلوروفورم

High-quality gene synthesis plasmid preparation process

يعمل خليط الفينول / الكلوروفورم على إذابة ملوثات البروتين والدهون ، بينما تظل الأحماض النووية في مرحلة الماء. ومع ذلك ، قد تكون هناك بقايا من الفينول أو الكلوروفورم في العينة النهائية ، والتي سوف تمنع التفاعلات الأنزيمية في اتجاه مجرى النهر.

بالإضافة إلى ذلك ، فإن الكلوروفورم والفينول ضاران بالبشر. لذلك ، نادرًا ما تستخدم هذه الطريقة في الإنتاج الصناعي.



ترسيب الإيثانول


ترسيب الإيثانول طريقة شائعة لتحلية وتركيز الحمض النووي. يمكن أن يغير الإيثانول بنية الحمض النووي ، بحيث يمكن ترسيب الحمض النووي من المحلول.

بعد إزالة الأملاح القابلة للذوبان والجزيئات العضوية الصغيرة ، قم بإعادة تعليق DNA البلازميد المترسب. تعتبر طريقة ترسيب الإيثانول رخيصة وفعالة ، ولكنها تؤدي أيضًا إلى تسريع شظايا RNA و ssDNA.



طريقة فصل عمود تنقية الحمض النووي (عمود الدوران)

High-quality plasmid preparation method

سيتم دمج الحمض النووي مع السيليكا الصلبة في ظل ظروف معينة. يمكن أن يؤدي تغيير الظروف إلى إزالة الحمض النووي وتنقيته. عادة ما تستخدم هذه الطريقة في مجموعات البلازميد miniprep. هذه الطريقة مريحة وسريعة ، لكن التكلفة أعلى.

يعتبر ترسيب الإيثانول وأعمدة الدوران من أكثر الطرق شيوعًا في صناعة التخليق الجيني والاستنساخ. يستخدم المزيد من الموردين ترسيب الإيثانول بسبب انخفاض تكلفته.

تمتلك شركة GeneralBiosystems تقنية احترافية لتخليق الجينات. إذا واجهت مشاكل في عملية تحضير البلازميدات عالية الجودة ، يمكنك طلب المساعدة من Generalbiosystems. لدينا طاقم بحث علمي محترف لإعداد وضمان إعداد عالي الجودة.