الصفحة الرئيسية > أخبار > اخبار الصناعة

كيفية تحسين جودة تخليق قليل النوكليوتيد؟

تحديث الوقت : 2020-12-23

المصدر:

الآراء : 33

كيفية تحسين جودة تخليق قليل النوكليوتيد؟
يُطلق على تخليق قليل النوكليوتيد التقليدي عمومًا تخليق العمود ، استنادًا إلى طريقة التوليف الكيميائي للفوسفوراميديت المكونة من أربع خطوات ، حيث يتم إجراء تخليق قليل النوكليوتيد على مرحلة صلبة ، ولا تزال تستخدمه معظم شركات تصنيع الحمض النووي التجارية.



في الوقت الحاضر ، يمكن لمركب الحمض النووي المؤتمت بالكامل على أساس طريقة تخليق الفوسفوراميديت زيادة إنتاجية توليف واحد من تسلسل واحد إلى 1536 تسلسلًا. كما أن تكلفة تخليق قليل النوكليوتيدات بطريقة الفوسفوراميديت آخذة في التناقص تدريجياً.

عادةً ما يصنع تخليق العمود أليغنوكليوتيدات بمقياس من 10 إلى 1000 نانومول ، وتتراوح التكلفة لكل قاعدة بين 0.05 دولار أمريكي و 0.17 دولار أمريكي. يمكن لهذه الأوليغنوكليوتيدات أن تصنع ما يصل إلى 100nt ، بمعدل خطأ 0.5٪ أو أقل ، وكفاءة الاقتران لكل مونومر تصل عادة إلى 99٪.

Oligonucleotide synthesis


ومع ذلك ، مع زيادة طول قليل النوكليوتيد ، عادة ما ينخفض إنتاج قليل النوكليوتيد كامل الطول. علاوة على ذلك ، سيؤثر التنقية العشوائية للأوليغومرات الاصطناعية على محصول قليل النوكليوتيدات كامل الطول ، خاصة في خطوة نزع الحماية الحمضية في دورة التخليق ، والأدينين عرضة لإزالة التبويض ، وفي النهاية يعزز العمود الفقري للقليل النوكليوتيد. شظية ، وبالتالي تقليل محصول قليل النوكليوتيدات كامل الطول.



يرجع الانخفاض الإضافي في جودة تخليق قليل النوكليوتيد إلى إدخال طفرات عشوائية أثناء عملية التوليف ، خاصة أنواع حذف قاعدة واحدة. تأتي هذه الأخطاء بشكل أساسي من الإزالة غير الكاملة لمجموعة حماية DMT أو انخفاض الكفاءة الكلية لخطوات الاقتران والسد في دورة التوليف.

من المستحيل إزالة الأخطاء التركيبية تمامًا ، لأن كفاءة أي تفاعل كيميائي لا يمكن أن تصل إلى 100٪. ومع ذلك ، فإن التحسينات في عملية التخليق يمكن أن تزيد من طول ونوعية تخليق قليل النوكليوتيد.



يعتمد موردو تخليق الحمض النووي السائد حاليًا بشكل عام على أليغنوكليوتيدات اصطناعية قائمة على العمود. نظرًا لأن أليغنوكليوتيد من نوع العمود يحتوي على تركيبة واحدة ، وعائد مرتفع ، ومعدل خطأ منخفض ، فمن الأسهل تجميعه لتخليق الجينات ولديه دقة أعلى ، مما يقلل بشكل كبير من صعوبة التشغيل وتكلفة تصحيح الخطأ.



تقلل خدمة تخليق قليل النوكليوتيدات عالية الإنتاجية التي تقدمها شركة Generalbiosystems إلى حد كبير من صعوبة وتكلفة التوليف تقنيًا ، ويمكن أن تقبل متطلبات تخليق قليل النوكليوتيد المخصص ، مع عائد تخليقي أعلى ومعدل خطأ منخفض ووقت تسليم أقصر. .